新孢子虫GRA6表达、定位及对小鼠免疫效力的初步分析

doi:10.11843/j.issn.0366-6964.2015.04.016

畜牧兽医学报 ›› 2015, Vol. 46 ›› Issue (4): 624-630.doi: 10.11843/j.issn.0366-6964.2015.04.016

新孢子虫GRA6表达、定位及对小鼠免疫效力的初步分析

邢明，刘晶，王辉，郝攀，刘群^*

（中国农业大学动物医学院，国家动物寄生原虫实验室，农业部人畜共患病重点开放实验室，北京 100193）

收稿日期:2014-08-14 出版日期:2015-04-23 发布日期:2015-04-23
通讯作者: 刘群， E-mail:qunliu@cau.edu.cn
作者简介:邢明（1987-），女，辽宁朝阳人，硕士，主要从事兽医寄生虫学研究，E-mail：xingming1002@sina.com；刘晶（1978-），女，黑龙江人，博士，副教授，主要从事兽医寄生虫学研究，E-mail：liujingvet@cau.edu.cn。二人共为第一作者
基金资助:
国家重点基础研究发展计划（973计划）（2015CB150300）；北京市自然科学基金(6131001)；中央高校基本科研业务费专项资金（2013XJ001）；教育部博士点基金（20130008120010）

Neospora caninum GRA6 Recombinant Expression，Localization and Preliminary Analysis on the Mice Immune Effect

XING Ming，LIU Jing，WANG Hui，HAO Pan，LIU Qun^*

(National Animal Protozoa Laboratory/Key Laboratory of Animal Epidemiology and Zoonosis of Ministry of Agriculture，College of Veterinary Medicine，China Agricultural University，Beijing 100193，China)

Received:2014-08-14 Online:2015-04-23 Published:2015-04-23

摘要/Abstract

摘要：

顶复亚门原虫在其侵入宿主细胞及其纳虫空泡的形成过程中，有多种蛋白质发挥着重要的作用，其中致密颗粒蛋白在纳虫空泡的形成和修饰过程中起着至关重要的作用。作者从新孢子虫基因组中扩增致密颗粒蛋白GRA6基因，构建原核表达质粒pGEX-NcGRA6，表达、纯化蛋白质，制备鼠源多抗，利用IFA对NcGRA6进行细胞内定位，显示其定位于纳虫空泡的网状系统。构建真核表达质粒pcDNA-GRA6，分别用真核质粒和重组蛋白质免疫BALB/c小鼠，给三免后小鼠腹腔接种2×106新孢子虫速殖子，观察小鼠临床变化。每次免疫前，采血检测抗体水平；攻虫后第30天，处死小鼠，利用RT-PCR检测小鼠脑内荷虫量，结果显示真核表达质粒和纯化蛋白免疫后均对小鼠提供了较好的免疫保护，与未免疫的对照组小鼠相比差异显著（P＜0.05）。

Abstract:

A variety of proteins are released during protozoan parasites invasion and growth in the host cell.Dense Granule protein is one of the key proteins which form and modify the parasitophorous vacuolar (PV).GRA6 gene was cloned from Neospora caninum genomic DNA.We constructed prokaryotic expression vector pGEX-GRA6 and eukaryotic expression vector pcDNA-GRA6.The protein was purified and immunized BALB/c mice to obtained high titer of serum.Results of indirect immunofluorescence (IFA) showed that GRA6 located at parasitophorous vacuolar network structure (PVN).BALB/c mice were immunized with recombinant protein or eukaryotic expression vector and challenged with Neospora caninum (2×10⁶).We monitored clinical symptoms and detected antibody levels of mice before each immunization.Thirty days after infection，brain burden of Neospora caninum was detected by RT-PCR.There were significant difference between immunization groups and control group (P<0.05)，which indicated that NcGRA6 had good immunoprotection for mice in both recombinant protein and eukaryotic expression vector.

中图分类号:

S852.723

邢明，刘晶，王辉，郝攀，刘群. 新孢子虫GRA6表达、定位及对小鼠免疫效力的初步分析[J]. 畜牧兽医学报, 2015, 46(4): 624-630.

XING Ming，LIU Jing，WANG Hui，HAO Pan，LIU Qun. Neospora caninum GRA6 Recombinant Expression，Localization and Preliminary Analysis on the Mice Immune Effect[J]. ACTA VETERINARIA ET ZOOTECHNICA SINICA, 2015, 46(4): 624-630.

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新孢子虫GRA6表达、定位及对小鼠免疫效力的初步分析

Neospora caninum GRA6 Recombinant Expression，Localization and Preliminary Analysis on the Mice Immune Effect

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